生化实验目的及原理
肝功能八项:肝功能检查的目的在于探测肝脏有无疾病、肝脏损害程度以及查明肝病原因、判断预后和鉴别发生黄疸的病因等
谷丙转氨酶(ALT/GPT):L-丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT > 丙-酮酸+L-谷氨酸
丙-酮酸+NADH+H+ LDH > 乳酸+NAD+
在340nm波长测定NADH每分钟吸光度的变化率(△A/分钟),计算其活性(速率法)
谷草转氨酶(AST/GOT):L-天冬门氨酸+α-酮戊二酸 AST > 草酰乙酸+谷氨酸
草酰乙酸+NADH MDH > 乳酸+NAD+
在340nm波长测定NADH每分钟吸光度的变化率(△A/分钟),计算其活性(速率法)
γ-谷氨酰基转移酶(GGT):γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝-基苯胺+双甘氨肽 r-G > γ-谷氨酰双甘氨肽+5-氨基-2-硝-基甲苯酸,在405nm波长测定每分钟吸光度的变化率△A/分钟),计算其活性(速率法)
总胆红素(T-BIL):在PH3左右有表面活性剂和加速剂的条件下,样品中的总胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。胆红素的黄色特异性吸光度下降,通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化,计算出样品中总胆红素的含量。(两点终点法)
直接胆红素(D-BIL):在PH3左右有表面活性剂和加速剂的条件下,样品中的直接胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。胆红素的黄色特异性吸光度下降,通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化,计算出样品中直接胆红素的含量。(两点终点法)
碱性磷酸酶(ALP):血清中的碱性磷酸酶在碱性条件下作用于对硝-基苯磷酸钠,生成对-硝基酚和磷酸盐,在405nm波长测定每分钟吸光度的变化率(△A/分钟),计算其活性(速率法)
白蛋白(ALB):在PH4.20左右的条件下,白蛋白分子上的正电荷鱼溴甲-酚绿上的阴离子集团结合形成绿色的复合物,在630nm波长测定吸光度,计算其含量。(终点法)
总胆汁酸(TBA):胆汁酸+S-NAD 3α-HSD > 3-酮类固醇+S-NADH
3-酮类固醇+S-NAGH 3α-HSD > 胆汁酸+NAD,
不断完成循环反应,在405nm波长测定每分钟S-NADH吸光度的变化率(△A/分钟),计算其活性(两点速率法)
样本的采集与保存
1、血清:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后 1,000×g 离心20分钟,取上清即可,将上清置于-20℃ 或-80℃保存,避免反复冻融。
2、血浆:用肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1,000×g 离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
开机前准备
A.检查电源排插,确认电源输入开关打开。
B.检查废液瓶是否已满,如满,请清空。
C.检查打印纸是否足够,如不够,添加打印纸。
D.检查清洗液和蒸馏水是否足够,如不够,请添加。
E.确认试剂盘39号位置已经放过稀释液,40号位置已经放置去离子水,如没有放置,请添加。
F.确认样本盘40号位置已经放置去离子水,如没有放置,请添加。
G.检查加样针,确认无污染,无弯折,如有污染,擦洗加样针,如有弯折,更换加样针。
注意事项
1、样本要求:样本应清澈透明,悬浮物应离心去除;避免使用溶血样本。样本收集后若不立即检测,冻存于-80°冰箱,避免反复冻融。样本检测时不要有气泡,以免取样针吸到气泡以为吸入了样本。样本溶血对实验有影响,要及时反馈。样本量要充足,检测需要留底量(100ul左右)。
2、操作要求:试剂配制要精确,点样量一定要精确,完全打尽移液枪内样本与试剂;配置的试剂倒入试剂瓶中要避免产生气泡,以免取样针吸到气泡以为吸入了试剂。上机指标的顺序会影响实验的结果,就是说试剂盒里试剂的成分或者显色反应会影响其他指标的检测结果,就像碱性磷酸酶中的含镁试剂会影响镁离子的检测;部分试剂含钾的检测项目会对酶法检测钾产生误差;肌酸激酶和肌酸激酶同工酶检测后对测定葡萄糖会造成假性增高,等。所以在实验前要合理安排上机顺序,避免实验相互干扰。
3、安全要求:检测时不要触碰样本试剂盘,以免被取样针戳伤。