镍琼脂糖凝胶 Ni
（NTA)-Berpharose FF
- 产品名称：
- 镍琼脂糖凝胶 Ni
（NTA)-Berpharose FF
- 英文名称：
- 型号：
- B2776
- 产品库存：
- 100
- 产品价格：
- 电议
镍-琼脂糖凝胶FF
（NTA)
（Ni Berpharose FF-NTA）1. 产品介绍镍-琼脂糖凝胶FF
（NTA)以琼脂糖微球为基质，活化偶联次氮基三乙酸
（NTA），之后螯合Ni2+。镍-琼脂糖凝胶FF
（NTA)主要用于分离能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带 His标签的重组蛋白。 镍 NTA琼脂糖凝胶 FF具特异性好，螯合镍更稳定，不易脱落，能耐受一定强度的还原剂，物理和化学稳定性好。
2.规格1ml
（预装柱）、5ml
（预装柱）、10ml
（预装柱）、20ml、100ml、500ml 3.产品性能性能指标基质6%琼脂糖微球配基Ni2+载量≥40mg His标签蛋白/ml粒径45-165μm建议流速50-300 cm/h耐压0.3MPa工作温度4-40℃pH稳定范围3-10储存缓冲液20%乙醇储存温度4-8℃ 4.纯化流程①平衡镍-琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。建议流速为100 cm/h。②上样
（
1)样品一般溶解于pH6-8的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。
（2）常用缓冲液有10-100 mM磷酸钠缓冲液、20-200 mM Tris-HCl缓冲液等。
（3）缓冲液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl以消除离子交换作用。
（4）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时，推荐使用50 mM PBS
（50 mM NaH2PO4、0.3 M NaCl、pH 8.0）作为初始缓冲液。③洗脱
（1）增加咪唑浓度进行洗脱是镍-琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。
（3）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，浓度从低到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
（4）有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。 洗脱方法：
（1）降低pH洗脱：大多数蛋白在pH4-6会被洗脱下来
（也可以在pH 3~4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度
（如0-0.5M咪唑、0-50 mM组氨酸、0-2M NH4Cl）。梯度洗脱最好在起始缓冲液的恒定pH值下进行。 5.在位清洗
（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：使用1.5M NaCl溶液接触时间为10-15分钟清洗，然后，再使用去离子水清洗10个柱体积。
（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：通过使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20分钟可以去除此类污染物。然后，再使用10倍柱体积的去离子水清洗。也可以选择使用含有去污剂的酸性或碱性溶液， 清洗填料2倍柱体积。例如，含有0.1–0.5% 非离子去污剂的0.1 M 醋酸溶液，接触时间 为1–2 小时。去污剂处理后，需要使用70%的乙醇清洗5个柱体积，以彻底去除去污剂。 最后使用10倍柱体积的去离子水清洗。5.
注意事项：1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。2)本产品保存条件为20%乙醇，4-8℃。3) 2-25℃，常压，避光运输。4）仅供科研实验使用。
