ELISA试剂盒应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA试剂盒可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。按照待测物性质的不同，ELISA试剂盒反应可以分为抗原检测反应及抗体检测反应。

　　

在医学领域上，能够进行检测的抗原包括：内分泌方面的雌性激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等，血液学方面的凝固因子(如第Ⅷ凝固因子)、红细胞抗原及结合球蛋白(Hapto Globin)等，肿瘤方面已试用检查甲胎蛋白(AFP)癌胚抗原(CEA)，此外还有霍乱弧菌、大肠肝菌、绿脓杆菌和破伤风梭菌毒素;脑膜炎球菌及淋球菌抗原;检测免疫抑制病人中常见的白色念殊菌抗原，检测病人或病兽的粪便中的轮状病毒;检测甲肝病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨细胞病毒等。

 

而用ELISA试剂盒检测抗体，已获得对多种传染病和寄生虫病的血清学诊断，亦开始广泛用于现场流行病学调查。ELISA试剂盒也可应用于以下病毒抗体检测。此外，还可用于鉴定病毒型别。在免疫性疾病方面有试用作自身疫病抗体测定以及对过敏的诊断。在卫生学方面，可用于检测食品中葡萄球菌肠毒素及沙门氏菌毒素等等。