γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL) 活性测试盒的测定步骤

( Glutamate Cysteine Ligase 分光光度法 50 T/48 样)

 

一、测定原理：

在ATP和Mg2*存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成y-谷氨酷半胱氨酸:同时ATP分解产生无机磷，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。

 

二、自备仪器用品:

低温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1L玻璃比色皿、浓硫酸、蒸馏水

 

三、试剂组成和配制:

试剂一:液体x1 瓶，4C保存:

试剂二:粉剂x1 瓶，4保存，临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解:

试剂三:粉剂x1 瓶，4保存，临用前加3.5mL蒸留水充分震荡溶解:

试剂四:液体x1 瓶，室温保存:

试剂五: 粉剂x1 瓶，4保存，临用前加30mL蒸馏水充分震荡溶解，缓缓加入1.0mL浓硫酸，边加边搅拌。

 

四、样品前处理:

样本粗酶液提取详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。可用本所的 A045-2 总蛋白定量测试盒(考马斯亮法或者 A045-3、A0454 总试盒(BCA )进蛋度的测定。

 

六、GCL测定步骤

1.分光光度计预热30min 以上，调节波长到660nm，用蒸馏水调零；

2.空白管:

 

γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL) 活性测试盒的测定步骤