实验培训- 如何保证样品的质量

 

决定样品质量的因素包括材料的选择、材料的培养、材料的处理和取样以及样品保存。

样品不合格，后续测定做得再好也是零，甚至是负数，因为浪费了大量时间、样品和经费！

样品是最宝贵的，因为试剂等可以再买，一旦样品质量不行，或者用完了，就只有重新培养、处理和取样，这个过程会比较长！

（1）材料的选择：选择合适的研究问题的材料。

细分为：遗传背景明确，不能混杂；如果是转基因材料，先要确认是否在拟研究的器官或者组织中表达；材料是否容易大批量培养，拟取样部位是否容易区分和获得，从而决定了能否得到足够的样品，供后期测定用。

（2）材料培养：查阅文献，结合材料特性，根据所研究的问题，确定合适的培养条件。原则保证材料正常生长发育，而且尽可能控制环境条件稳定一致。

例如温度、水分、CO2浓度、培养基等，不要过于信任控温仪器，要实际测定并且经常观察是否为要求的温度以及温度变化是否平稳。

（3）材料处理：确定设计处理方式、处理部位、处理时期和处理浓度等处理组合。

通过预实验，一方面要找出最佳处理（即该处理与对照相比，出现了预期中最典型的生物学现象），这样可以大大减少处理的种类；另一方面还可以确定从最佳处理开始到典型生物学现象出现的时长，为设计取样间隔提供参考。这样，在正式实验时，仅仅设计对照和最佳处理两组即可，从而大大减少材料培养与处理、取样和测定的工作量。可见，预实验非常重要！

（4）取样：典型性、代表性、间隔和数量。

取样典型性是指，与对照组相比，处理组一定要呈现预期的生物学现象或者症状，取样时要有意识地选取具备典型生物学现象或者症状的样品，通俗地讲就是处理组的样品与对照组样品相比一定要存在显著差异，而且最好差异程度近似的那些个体或者器官或者组织。否则，进一步进行后续测定是没有意义的。

取样的代表性是指，实际测定所取的样品部分一定要能够代表整个样品状况。否则测定结果无法代表整个样品。随意取样品的一部分进行测定，常常还会导致测定结果变化不规律。例如，土壤样品可以混匀后按照对角线法依次减少样品量，即按照二分之一、四分之一、八分之一等，直到剩下的样品量符合测定所需量；叶片或者果实样品，可以通过对称轴法，依次去掉二分之一、四分之一、八分之一等，直到剩下剩下的样品量符合测定所需量。再如叶片或者果实等样品，可以根据对称轴来取样。如果样品数量不少很多，还可以先全部液氮研磨后，再进行分装，这样就能充分保证取样的代表性。

取样间隔：取样期是指从处理开始，到处理组出现预期中的典型生物学现象出现为止；除非有明显发育阶段的变化，或者有参考文献，否则可以考虑等间隔取样，即把整个取样期等时间间隔进行取样。一般应该至少划分为五个时期以上进行取样。在可能的情况下应该尽可能取样时期间隔小一些，以确保取到指标变化拐点的样品。

取样数量：指每种处理（包括对照组）每次取样品的数量。一般而言，只要条件许可，就应该尽可能多取，这样可以保持后期测定的需要（宁可用不上，也不能不够测定用）。因为测定过程中可能因为各种各样的原因导致测定失败，或者对测定结果有疑问，这样可以重新测定，或者不测定一些疑问的样品。另外，还可以待测定结果出来后，马上进行分析，进一步进行新的指标测定。因为生物样品不同批次之间可能存在差异，同一批样品进行测定，就可以有效减少样品差异。

（5）样品规范保存：样品保存过程中要尽最大可能减少样品中拟测定指标发生变化。

有条件的情况下，样品取好后立即进行液氮速冻。如果不具备条件，也应该尽可能缩短样品进入超低温冰箱的时间。对于大体积样品，应该进行分割，分别小包装后再液氮速冻或者放入超低温冰箱。如果需要测定多个指标，应该把样品分成小包装再冻存，免得反复从冰箱取出和放回，避免反复冻融对样品的破坏。样品放进冰箱之前，要检查冰箱是否正常工作、冰箱设定温度是否正常和冰箱内样品是否过多，样品过多、样品体积过大或者样品排放不整齐（没有留出通风通道），会严重影响冰箱制冷效果，不能确保样品迅速达到所需冷冻温度，造成样品变质！另外，样品放进冰箱后不是就万事大吉了，停电或者别人拿去样品时，都可能造成样品变质，等你从冰箱拿出样品时，你会发现样品仍然冻得硬邦邦的，但是其实样品已经变质了。