信帆生物:ELISA试剂盒的组成

点击次数:156次     发布时间:2025/2/27 14:53:57

 信帆生物提供高灵敏度,特异性好,即用型的ELISA试剂盒,长期与全国各大高校合作,引用文献上千篇。

ELISA试剂盒包含预包被酶标板、检测抗体、链酶亲和素标记的HRP、标准品、TMB显色液、终止液、洗液、封板膜、检测缓冲液等10个成分。



ELISA
在操作前试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。ELISA缓冲液配制
吸取5毫升10x Assay Buffer缓冲液,至50ml离心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,加蒸馏水至1000毫升。
加样注意事项:
取出已恢复至室温的酶标板,加入300微升洗液,以洗去包被抗体保护剂,使包被抗体处于最佳活性状态,静置浸泡30秒。洗板结束后,立即使用酶标板,不要让酶标板干燥。
排版布局H1H2孔为空白孔,A1A1G1G2为标准曲线的S1S7孔,每孔加入50微升的Assay Buffer,根据排版,每孔加入50微升标准品和样本,加样时,垂直悬空加入液体,加完后枪头轻轻碰液面(建议标准品,样本都做复孔),最后每孔加入50微升检测抗体,加完后用封板膜小心封好酶标板,为让抗原抗体充分接触。

洗涤注意事项:

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA 操作中,洗涤是主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。

计算方法:

检测完成后,以标准品浓度做为纵坐标,对应的吸光度(OD值)作为横坐标,利用计算机软件,采用四参数Logistic曲线拟合(4-pl),创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的终浓度。

 抄笔记总结:

1.  从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;

4.  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

信帆生物是专业的ELISA试剂盒供应商,提供大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒,人ELISA试剂盒等等,产品质量稳定,库存充足,价格实惠,深受广大科研用户青睐。

 

 

   

 

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