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标题《lncRNA LUCAT1对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究》
摘要:目的探讨lncRNA LUCAT1对膀胱癌细胞的增殖和凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法培养正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞J82、5637、BIU-87,将膀胱癌细胞5637随机分为control组、si-NC组,si-LUCAT1组、pcDNA-NC组、pcDNA-LUCAT1组、si-LUCAT1+anti-miR-NC组、si-LUCAT1+anti-miR-493-5p组。qRT-PCR法检测miR-493-5p和LUCAT1表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证LUCAT1和miR-493-5p的靶向关系。结果与膀胱上皮细胞SV-HUC-1相比,膀胱癌细胞J82、5637、BIU-87中LUCAT1的表达水平明显升高,miR-493-5p表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与si-NC组相比,si-LUCAT1组细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1
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细胞凋亡是细胞的基本特征之一,在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为35.8 KD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结合到凋亡细胞后,在蓝色光的激发下,发出绿色荧光,区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)是一种核酸染料,它不能穿透完整细胞膜,但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透,并使细胞核红染。将FITC-Annexin V 与PI 匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。